Cuaderno de prácticas microbiología

Tinción Kinyou OBJETIVO: Determinar la ácido alcohol resistencia de las micobacterias en muestras clínicas  Material: Mechero Asa de siembra Porta Agua destilada Colorantes Colonia. Procedimiento 1.Extensión 2.Desecación 3.Fijación.  4.Colorante de Kinyou 3 min. (fucsina).  5.Lavar con agua destilada destilada.  6.Cubrir con solución de Gabett 1 min. (azul de metileno)

Sensibilidad a la novobiocina: FUNDAMENTO: •Algunas especies del género Staphylococcus son resistentes a la novobiocina. OBJETIVO: Diferencia S.saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los demás estafilococos coagulasa negativos.  Material Placa de medio DNAasa Mechero Asas de siembra Pinzas Disco antibiótico Procedimiento 1.Sembramos la colonia de aureus cubriendo practicamente toda la placa 2.Posteriormente esterilizamos unas pinzas y cogemos un disco que colocaremos en medio de la placa 3.Incubamos. Resultado:Un halo de inhibición de crecimiento, menor o igual a 16mm, corresponde a S. saprophyticus.

Prueba de coagulasa FUNDAMENTO: Estudia la capacidad del microorganismo para producir el enzima coagulasa que origina la coagulación del plasma humano o de conejo.   OBJETIVO: Diferenciar S. aureus (coagulasa +) de los otros Staphylococcus (coagulasa -)  Material: Tubo de 3ml Plasma citratado Pipeta y puntas Mechero Asa de siembra Procedimiento 1.En el tubo echamos 0.5 ml de plasma citratado y emulsionamos con las colonias de aureus. 2.Incubamos a 37ºC y esperamos a que coagule unas 4 h para que de positivo. A nosotros nos dio negativo. -Este seria un resultado positivo:

Prueba DNA-asa FUNDAMENTO: Estudia la capacidad que tienen algunas bacterias para producir el enzima DNAsa, que produce la degradación del DNA que contiene el medio de cultivo. OBJETIVO: Diferencia las especies patógenas de Staphylococcus (DNAsa +) de las no patógenas (DNAsa -).  Otros géneros como Serratia y Bacillus también dan positiva esta prueba.  Material: Medio de DNAasa en placa Mechero Asa de siembra Procedieminto: Resembramos aureus en la placa DNAasa pero, por un método distinto,  haciendo una estría de unos 2 cm. Incubamos 24 h /37ºC, después echamos unas gotas de ácido clorhídrico y observaremos la aparición de zonas claras o coloreadas de rosa, respectivamente, alrededor de la zona sembrada. NOTA: a nosotros no se nos veía nada por la cantidad de colonia que había.

Fermentación de manitol. FUNDAMENTO: Estudia la capacidad de los microorganismos para fermentar el manitol y crecer en presencia de una elevada concentración de NaCl (Medio de Chapman) Cuando el microorganismo fermenta el manitol se producen metabolitos ácidos que cambian el pH del medio y el indicador (rojo fenol) vira a amarillo.  OBJETIVO: Diferencia S. aureus del resto de los estafilococos. Material: Medio de manitol en placa Mechero Asas de siembra Procedimiento: Hacemos una resiembra en el medio de manitol con aureus por agotamiento de estrías e incubamos Si es positivo se observara como ha crecido y se ha ido alimentando con el color amarillento de la placa Nosotros aquí no observamos nada, pero otros compañeros:

Prueba óxido-fermentación FUNDAMENTO: Estudia la capacidad de los microorganismos para oxidar y/o fermentar la glucosa produciendo ácido, que se detecta por la presencia de un indicador de pH (azul de bromotimol), que vira de color verde a amarillo.  OBJETIVO: Diferencia cocos Gram (+) entre sí.  Tambien diferencia Pseudomonas y Enterobacterias de otros bacilos Gram (-). Material: Dos rubos con medio (O/F) Vaselina líquida Mechero Asas de siembra Procedimiento Sembramos en picadura los dos tubos con aureus.  A uno de los tubos le añadimos vaselina líquida para conseguir anaerobiosis y por último incubamos durante 24-48 horas a 37ºC Lectura Con vaselina-Sin vaselina-Significado Verde      -      Verde    -     Sin glucosa Verde      -     Amarillo  -   Oxidativo Amarillo   -    Amarillo   -   Fermentativo Los resultados no fueron claros pues los medios tenian bastante tiempo pero si podíamos observar que estaban mas amarillentos que al principio

Prueba Catalasa FUNDAMENTO: Enzima, propia de las bacterias anaerobias facultativas, que descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno, que se desprende en forma de burbujas: 2H2O2 2H2O + O2 (burbujas)  De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.  OBJETIVO: Diferenciar el género Staphylococcus y Micrococcus (catalasa +) del género Streptococcus (catalasa -). Material: Mechero Asas de siembra esteriles Agua oxigenada Portas Procedimiento: En un porta hacemos una extensión del microorganismo aureus y a continuación echamos una gota de agua oxigenada, con esto podremos observar que salen burbujas y por tanto es positivo. NOTA: Las colonias se deben tomar de un medio sin sangre ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados