Cuaderno de prácticas microbiología

Método de difusión en agar Método de Kirby-Bauer Fundamento: Consiste en enfrentar la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar a una solución antibiótica absorbida en unos discos. Procedimiento: 1.Preparar un cultivo de 18 horas , en TSA o en BHIA, de las bacterias que hay que ensayar. 2.Inoculamos algunas colonias en 5ml de SSF e incubamos a 37ºC de 5-10 min hasta que la turbidez sea visible. 3.Sembramos en masa  4.Colocamos los discos de antibióticos separados 20mm y a 15mm del borde aproximadamente. 5.Incubamos la placa durante 18-24 horas a 37ºC 6.Medimos los diámetros en las zonas de inhibición  NOTA: Si hubiera dos halos juntos se mide en otra dirección, pero al final no se pudo observar ningún resultado. Resultados: Resistentes: no halo de inhibición. Antibiótico no efectivo. Método de dilución en agar Fundamento Utiliza tiras E-tests que contienen, en su superficie inferior, un gradiente de concentración del

API INTRODUCCIÓN Y OBJETIVO DE LA PRUEBA API 20 E  Es un sistema estandarizado que permite la identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes, que incluye 21 tests bioquímicos miniaturizados, así como una base de datos. La lista completa de las bacterias posibles de identificar con este sistema se presenta en la Tabla de Identificación al final de la presente ficha técnica.  PRINCIPIO  La galería del sistema API 20 E se compone de 20 microtubos que contienen los substratos deshidratados. Los microtubos se inoculan con una suspensión bacteriana que reconstituye los tests. Las reacciones producidas durante el periodo de incubación se traducen en cambios de color espontáneos o revelados mediante la adición de reactivos.  La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando la Tabla de Lectura, y la identificación se obtiene con la ayuda del Catálogo Analítico o del software de identificación.  PRESENTACIÓN Caja de 25 tests (ref. 20 100) 

  Pruebas bioquímicas de identificación de Bacilos Gram (-) Kligler Curiosidades:  Diferenciación de enterobacterias  Medio sólido diferencial. Se prepara en slant Contiene: lactosa (1,0%), glucosa (0,1%), peptona(20g) y un indicador de pH (rojo fenol)que vira a marillo cuando el pH es ácido y a color rojo más intenso (rojo cereza) cuando el pH es alcalino. La fermentación de los hidratos de carbono, sigue varias rutas metabólicas, y se produce: En condiciones anaerobias (fondo del tubo) En condiciones aerobias (superficie inclinada) Algunos microorganismos pueden fermentar: Ambos hidratos de carbono (glucosa y lactosa) Solo la glucosa (lactosa negarivos) No fermentan ni la glucosa ni la lactosa. En el mismo tubo se determinan simultáneamente: Fermentación y utilización de glucosa y lactosa. Producto de gas Producción de ácido sulfhídrico. Procedimiento 1.Cogemos el medio Kligler 2.Se toma una colonia de la muestra y se siembra en picaduraen el fo

Pruebas de identificación de cocos G- 13.12.19 Prueba de la oxidasa. Capacidad de producir la enzima oxidasa que cataliza, en la cadena respiratoria, la tranferencia de electrones desde un sustrato prgánico hasta el oxígeno. Su propducción se pone en manifiesto con el reactivo de Kovacs (tretametil-p-fenilen diamina) que se oxida en presencia del enzima transformándose en un producto coloreado. Interés: Diferenciar los génerps Neisseria, Branhamella y moraxella oxidasa +, del género Acinetobacter (oxidasa -) Entre los bacilos G- diferenciar Pseudomonas (+) y enterobacterias (-) Técnica: 1.Colocar un trozo de papel de filtro en un portaobjetos 2.Agregamos 2 gotas del reactivo Kovavs en el centro del papel. 3.Extender una colonia, con el asa, sobre el papel impregnado. 4.Esperar a que cambie de color, pero a nosotras nos salió negativo. Fermentación de azucares Las bacterias anaerobias y aerobias facultyativas, con frecuencia, fermentan los carbohidratos produciendo áci