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INTRODUCCIÓN Y OBJETIVO DE LA PRUEBA API 20 E 

Es un sistema estandarizado que permite la identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes, que incluye 21 tests bioquímicos miniaturizados, así como una base de datos. La lista completa de las bacterias posibles de identificar con este sistema se presenta en la Tabla de Identificación al final de la presente ficha técnica. 

PRINCIPIO 

La galería del sistema API 20 E se compone de 20 microtubos que contienen los substratos deshidratados. Los microtubos se inoculan con una suspensión bacteriana que reconstituye los tests. Las reacciones producidas durante el periodo de incubación se traducen en cambios de color espontáneos o revelados mediante la adición de reactivos. 
La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando la Tabla de Lectura, y la identificación se obtiene con la ayuda del Catálogo Analítico o del software de identificación. 

PRESENTACIÓN

Caja de 25 tests (ref. 20 100) 

• 25 galerías API 20 E 
• 25 cámaras de incubación 
• 25 hojas de resultados 
• 1 barra de cierre 

1 ficha técnica Caja de 100 tests (ref. 20 160) 

• 100 galerías API 20 E (4x25 galerías) 
• 100 cámaras de incubación 
• 100 hojas de resultados 
• 1 barra de cierre 
• 1 ficha técnica 

COMPOSICIÓN DE LA GALERÍA 

La composición de la galería API 20 E se puede consultar en la Tabla de Lectura de la presente ficha técnica. 

REACTIVOS Y MATERIAL NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

Reactivos 

• API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (ref. 20 230) o API Suspension Medium, 5 ml (ref. 20 150)
• Caja de reactivos API 20 E (ref. 20 120) o reactivos individuales: TDA (ref. 70 402) JAMES (ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (ref. 70 442)
• Reactivo Zn (ref. 70 380) - Oxidasa (ref. 55 635*) * referencia no comercializada en ciertos países: utilizar un reactivo equivalente.
• Aceite de parafina (ref. 70 100)
• Catálogo Analítico API 20 E (ref. 20 190) o Software de Identificación apiweb TM (Réf. 40 011) (consultar con bioMérieux) 

Material 

• Pipetas o PSIpettes 
• Gradilla para ampollas
• Protege-ampollas
• Equipo general de laboratorio de bacteriología 

REACTIVOS COMPLEMENTARIOS

• API OF Medium (ref. 50 110): Ensayo para la determinación del metabolismo fermentativo u oxidativo de la glucosa.
• API M Medium (ref. 50 120): Ensayo para la determinación de la movilidad de las bacterias aero-anaerobias. 

PRECAUCIONES DE UTILIZACIÓN  

• Para diagnóstico in vitro y control microbiológico. 
• Exclusivamente para uso profesional. 
• Este envase contiene componentes de origen animal. Dado que no se puede controlar el origen y/o el estado sanitario de los animales, no es posible garantizar de forma absoluta que estos productos no contengan ningún agente patógeno transmisible, por lo que se recomienda manipularlos con todas las precauciones de uso relativas a los productos potencialmente infecciosos, (no ingerir, no inhalar). 
• Todas las muestras, cultivos bacterianos y productos inoculados deben ser considerados como potencialmente infecciosos y deben ser manipulados de modo apropiado. Durante toda la manipulación, deben respetarse las normas de asépsia y tomar las precauciones habituales de manipulación para el grupo de bacterias estudiadas; consultar "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infection; Approved Guideline – Revisión en vigor". Para información complementaria sobre las precauciones de manipulación, consultar al "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH - última edición", o la reglamentación vigente en el país de utilización.
• No utilizar los reactivos después de su fecha de caducidad.
• Antes de su utilización, asegurarse de la integridad del embalaje y sus componentes.
• No utilizar galerías que hayan sufrido una alteración física: cúpula deformada, bolsa deshidratante abierta.
• Los resultados presentados han sido obtenidos mediante la metodología indicada en la presente ficha técnica. Toda desviación en la metodología puede alterar los resultados.
• La interpretación de los resultados del test debe ser realizada teniendo en cuenta un contexto clínico o de otro tipo, el origen de las muestras, los aspectos macro y microscópicos de la cepa y, eventualmente, los resultados de otros tests, en particular del antibiograma. 

Preparación de la galería

1. Introducir la suspensión bacteriana en los tubos de la galería con la ayuda de la misma pipeta (para evitar la formación de burbujas en el fondo de los tubos,colocar la punta de la pipeta o de la PSIpette sobre la pared de la cúpula, inclinando ligeramente la cámara de incubación hácia delante) : 

• Para las pruebas CIT , VP y GEL , llenar el tubo y la cúpula
• Para las otras pruebas, llenar únicamente los tubos (no las cúpulas)
• Para las pruebas : ADH, LDC, ODC, H2S, URE crear una atmósfera anaerobia llenando la cúpula con aceite de parafina.

2.Cerrar la cámara de incubación. 

3.Incubar a 36ºC ± 2ºC durante 18-24 horas. 

LECTURA E INTERPRETACIÓN 

Lectura de la galería 

Después de la incubación, la lectura de la galería debe hacerse remitiéndose a la Tabla de Lectura. 

Caso de que 3 o más ensayos (test GLU + o -), resultasen positivos, anotar en la hoja de resultados todas las reacciones espontáneas y después revelar los ensayos que necesitan la adición de reactivos:

• Prueba TDA: agregar una gota del reactivo TDA. Un color marrón-rojizo indica una reacción positiva que se anotará en la hoja de resultados.
• Prueba IND: agregar 1 gota del reactivo JAMES. Un color rosado que se difumina en toda la cúpula indica una reacción positiva, que se debe anotar en la hoja de resultados.
• Prueba VP: agregar una gota de los reactivos VP 1 y VP 2. Esperar un mínimo de 10 minutos. Un color rosa o rojo indica una reacción positiva que se anotará en la hoja de resultados. Una débil coloración rosa que aparece después de 10 minutos debe ser considerada como negativa. 

NOTA: La prueba de investigación sobre la producción de Indól debe ser realizada en último lugar, pues esta reacción libera gases que pueden alterar la interpretación de las otras pruebas de la galería. No volver a colocar la tapa de la cámara de incubación después de agregar el reactivo.

Determinación del perfil numérico: 
En la hoja de resultados, los tests están separados en grupos de tres y se indica para cada uno un valor de 1, 2 ó 4. Como la galería API 20 E comporta 20 ensayos, sumando al interior de cada grupo los valores que corresponden a reacciones positivas, se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. (A la reacción de la oxidasa, que constituye el test n° 21 se le asigna el valor 4, cuando resulte positiva).

• Identificación: Se realiza a partir de la base de datos (V4.1). * Con la ayuda del Catálogo

Analítico:

Localizar el perfil numérico en la lista de los perfiles. 
* Con la ayuda del software de identificación apiweb TM: - Introducir manualmente mediante el teclado el perfil numérico de 7 cifras.