Pruebas de identificación de cocos G-

Pruebas de identificación de cocos G- 13.12.19

Prueba de la oxidasa.

Capacidad de producir la enzima oxidasa que cataliza, en la cadena respiratoria, la tranferencia de electrones desde un sustrato prgánico hasta el oxígeno.
Su propducción se pone en manifiesto con el reactivo de Kovacs (tretametil-p-fenilen diamina) que se oxida en presencia del enzima transformándose en un producto coloreado.

Interés:

Diferenciar los génerps Neisseria, Branhamella y moraxella oxidasa +, del género Acinetobacter (oxidasa -)
Entre los bacilos G- diferenciar Pseudomonas (+) y enterobacterias (-)

Técnica:

1.Colocar un trozo de papel de filtro en un portaobjetos
2.Agregamos 2 gotas del reactivo Kovavs en el centro del papel.
3.Extender una colonia, con el asa, sobre el papel impregnado.
4.Esperar a que cambie de color, pero a nosotras nos salió negativo.

Fermentación de azucares

Las bacterias anaerobias y aerobias facultyativas, con frecuencia, fermentan los carbohidratos produciendo ácidos orgánicps y gas (H2 o CO2) que se detectan mediante un indicador de pH y una campana Durham.
Para diferenciar las especies (sobre todo en las bacterias entéricas), se pueden utilizar diferentes azúcares (glucosa, maltosa, lactosa, etc9 como sustrato.

Técnica:

1.Incubar la bacteria en un medio liquido que contenga ua pequeña cantidad de peptona (agua de peptona), un indicador de pH (rojo de fenol) y una fuente de carbono fementable (glucossa) al 1-2%
2.Ponemos dentrpo de los tubos una campana Durham
4.Incubamos a 37ºC durante 24 h.
El resultado final fue el correcto, formaba carbohidratos ya que produzco ácidos (cambio de color a amarillo) y formó gas dentro de la campana.

Beta galactosidasa.

Determina la capacidad de algunas bacterias, que poseen el enzima B-galactosidasa, para fermentar la lactoa originando glucosa y galactosa.

Para realizar la prueba se añade un sustrato artificial, ONPG (ortonitrofenil galactósido), que al ser hidrolizado por la B-galactosidasa origina un compuesto (orto-nitrofenol) de color amarillo.

Tecnica

1.Depositamos un disco de ONPG en un tubo de ensayo con 1ml de solución salina estéril.
2.Inoculamos una colonia.
3.Incubamos durante un día a 37ºC

Resultado:

A nosotras no nos salió correctamente ya que el tubo solo puede cambiar de color a amarillo y a nosotras se nos puso rosita.

Interés:

• Diferenciar a Neisseria lactámica de otras especies Neisseria.
• Diferenciar Enterobacterias:

-Que dan positiva la prueba: E.coli, Klebsiella, aerobacter y enterobacter.
-Que dan negativa la prueba: Proteus, Salmonella, Shigella y Pseudomonas.