Cuaderno de prácticas microbiología

TINCIONES ESTRUCTURALES TINCIÓN DE WIRTZ  FUNDAMENTO: Las esporas esporas son formas de resistencia producidas por algunas bacterias (Bacillus y Clostridium).  Presentan una pared impermeable que dificulta su tinción.  Mediante el calor (que actúa como mordiente) se fuerza la coloración de manera que una vez teñidas, se decolora toda la bacteria pero no lo hace la espora. Para llevar a cabo esta tinción se necesitan cultivos de 48 horas como mínimo.  Frotis y fijación: Poner una gota de agua en un porta Tomar la muestra de un cultivo de Bacillus. Extender sobre el agua y fijar a la llama del mechero. Cubrir la preparación con verde malaquita durante 1 min. Calentar, con un hisopo de algodón empapado en alcohol y prendido con la llama del mechero, hasta la emisión de vapores. Mantener caliente durante 5min Lavar con agua  Teñir con Safranina 1’  Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio TINCIÓN DECÁPSULAS. MÉTODO DE ANTHONY 

TINCIÓN DE GRAM OBJETIVO: Diferenciar las bacterias en Gram (+) y Gram (-) en función de la distinta composición de su pared bacteriana. MATERIAL Mechero Bunsen  Portaobjetos  Asa de platino  Pipeta Pasteur  Colorantes de Gram (cristal violeta, lugol, alcohol - acetona, safranina )  Agua destilada estéril  Cristalizador, barras paralelas, frasco lavador, microscopio  Muestra de material clínico o cultivo bacteriano. Extensión:  Colocar en un portaobjetos limpio, seco y desengrasado, una gota de SSF estéril utilizando el asa de platino previamente esterilizada.  Tomar asépticamente con el asa una pequeña muestra del cultivo sólido y mezclar con la gota de SSF para obtener una suspensión.  Extender la suspensión con el asa de platino previamente esterilizada y enfriada. NOTA: Es importante que la preparación sea fina: – Si se pone demasiada muestra, el frotis quedará muy grueso (se observará una gran mancha coloreada). En el microscopio, con el objeti

FROTIS Y TINCIONES SIMPLES OBJETIVO: Familiarizarnos con los frotis y tinciones, y así también conocer los microorganismos y poder observarlos a microscopio. PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO  MATERIAL  Asa de platino Mechero Bunsen Portaobjetos Muestras bacterianas de origen natural (yogur, levadura de cerveza, sarro dental, etc.) Colorantes para tinción (cristal violeta, safranina, azul de metileno, metileno, etc.), Microscopio y aceite de inmersión. Fundamentos y Técnicas de Análisis Microbiológicos  SENCILLA BACTERIAS DEL YOGOURT  1.Sobre un portaobjetos desengrasado realizar realizar la extensión  o frotis, tomando una mínima porción de yogur, con un asa de siembra previamente flameada: Colocar una pequeña gota de agua destilada en el porta.  Con el asa de Platino, estéril, transferir una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido a la gota. Remover la mezcla con el asa hasta formar una suspensión homogénea y extenderla bien con el as

SIEMBRA Y AISLAMIENTO OBJETIVO: Obtener nuevas colonias, para próximas pruebas y sobretodo para saber su procedimiento. MATERIAL Mechero Bunsen.  Hisopo . Asa e hilo de platino . Culltivos bacterianos o muestras . Medios de cultivo distribuidos en placas de Petri y en tubo.  Gradillas para tubos de ensayo. PREPARACIÓN DE INÓCULOS A PARTIR DE UN CULTIVO JOVEN O DE UN PRODUCTO PATOLÓGICO. Tomar varias colonias (de 3 a 5) que estén bien aisladas, o bien una porción porción de muestra muestra biológica. Suspenderlas en un tubo que contengan aproximadamente 5 mililitros de agua destilada destilada estéril o un caldo de cultivo Incubar en estufa: – De 18 a 24 horas si la muestra o el cultivo es sólido – hasta conseguir una turbidez del 0,5 de la escala de Mc Farland. SIEMBRA EN PLACA PARA AISLAMIENTO  Flamear el asa de siembra y enfriarla en las proximidades del mechero  Tomar una muestra del cultivo de microorganismos y extenderla sobre la superficie de una p

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO EN PLACAS Y TUBO OBJETIVO:  Obtener medios que posteriormente utilizaremos para cultivar. MATERIAL: Balanza. Vidrio de reloj o papel de aluminio.  Cucharilla‐espátula.  Agua destilada.  Probeta.   Pipeta. Matraz erlenmeyer y tapón para el matraz.  Placa calefactora‐agitadora. Imán y varilla recogeimanes. Medios de cultivo deshidratados.  Agua destilada.  Placas de Petri. Tubos de ensayo. Tapones tapones para tubos de ensayo.  Autoclave. Mechero Bunsen. PROCEDIMIENTO. Pesar la cantidad correspondiente de medio de cultivo, de acuerdo con los cálculos realizados, y rehidratarlo con la cantidad adecuada de agua destilada.  Calentar el matraz Erlenmeyer, que contiene el medio de cultivo disuelto, en continua agitación, hasta que comience a hervir. Retirar del calor y tapar con un tapón de algodón Envolver el matraz en papel de aluminio y autoclavar a la temperatura y durante el tiempo que nos indique el fabricant

ESTERILIZACIÓN  DEL ASA DE PT Y BOCA DE TUBOS  MANEJO DE ASAS, TAPONES Y TUBOS OBJETIVO: Aprender las técnicas básicas para cultivar. MATERIAL: Asa de platino.  Tubo de vidrio. Tapón para tubo  Mechero Bunsen. TECNICA: Tomar el tubo con la mano izquierda, de modo que el fondo toque la palma de la mano. Tomar el asa con los dedos pulgar, índice y medio de la mano derecha, dejando libres el anular y el meñique. Flamear el asa, introduciendo la punta en el cono frio de la llama del mechero, en posición vertical y luego ir levantándola hasta que toda ella quede al rojo vivo.                                                                            •Pasar el asa por la llama en un ángulo de 60º con la vertical, manteniéndola siempre en posición paralela al cuerpo.                              •Flamear el metal adyacente al asa. Trabajando en un área de 15‐ 20 cm, alrededor del mechero, tomar el tapón del tubo con los dedos anular y meñique de la mano derecha y quitarlo